双荧光素酶是一种荧光蛋白质，能够在存在外源底物的情况下产生强烈的蓝色和黄绿色荧光。它的原理是基于两个不同的荧光物质连接在一起，形成一个高效的荧光体系。

当双荧光素酶被加入到含有底物的体系中，底物可以被特异性地加入到双荧光素酶的活性位点上，激活酶的荧光发射。

由于蓝色和黄绿色荧光发射的波长不同，因此双荧光素酶可以在同一反应中同时检测多个分子和事件，具有非常广泛的应用价值。